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実験の基本情報

培地組成・調製方法一覧

培地組成・調製方法一覧

分子生物学実験の培養操作によく用いられる培地の組成とその調製法です。
行ごとに大腸菌・酵母・ラムダファージ等の培養対象をまとめ、見やすい一覧表にしました。
LB培地、YT培地、SOC培地など、基本的な培地から後入れできる青白スクリーニング用添加剤まで網羅しています。

 

 

 

LB Broth

汎用培地で、大腸菌の培養に主に用いられます。

  • Tryptone
    10
    g
  • Yeast extract
    5
    g
  • NaCl
    10
    g
  • Adjust pH with NaOH sol. to 7.0
  • (Agar
    15
    g)
  • H2O
    up to 1
    L
autoclave
※ 塩濃度を調節した培地、LB-Lennoxの場合は5 g、LB-low saltの場合は0.5 gに変更します。

2x YT Broth

LP培地より長い期間の培養や高濃度の培養に用いられます。

  • Tryptone
    16
    g
  • Yeast extract
    10
    g
  • NaCl
    5
    g
  • Adjust pH with NaOH sol. to 7.0
  • (Agar
    15
    g)
  • H2O
    up to 1
    L
autoclave

Super Broth

YT培地より高濃度の培養に用いられます。

  • Tryptone
    32
    g
  • Yeast extract
    20
    g
  • NaCl
    5
    g
  • 1N NaOH
    5
    mL
  • (Agar
    15
    g)
  • H2O
    up to 1
    L
autoclave

TB (Terrific Broth)

栄養素に富み、大腸菌をLB培地より高収量で得られます。

  • Tryptone
    12
    g
  • Yeast extract
    24
    g
  • Glycerol
    4
    mL
  • H2O
    up to 900
    mL
autoclave
  • KH2PO4
    2.31
    g
  • K2HPO4
    12.54
    g
  • H2O
    up to 100
    mL
autoclave
→ 上記溶液を混合し1Lとする。

青白スクリーニング用添加剤

目的DNAフラグメントの挿入の有無を簡易的に確認することができます。

  • 0.1 M IPTG
    50
    μL
  • 20-80 mg/mL X-gal/DMF sol.※1
    10
    μL
スプレッダーで10 cmプレートに塗布する※2
※1 高濃度にすることで発色がよくなるため偽陰性や反応時間を低減することができます。
※2 プレートの端はスプレッダーが届きにくく、擬陽性が生じやすいため注意が必要です。

SOB Medium

LP培地よりも栄養価が高く、コンピテントセルの調製に用いられます。
BDLのコンピテントセルは改良を重ね、厳格な基準で製造されています。

  • Tryptone
    20
    g
  • Yeast extract
    5
    g
  • NaCl
    0.5
    g
  • KCl
    0.186
    g
  • Adjust pH with NaOH sol. to 7.0
  • H2O
    up to 1
    L
↓autoclave
  • 2M MgCl2 (autoclaved)
    5
    mL
  • 1.005
    L

SOC Medium

SOBにグルコースを添加した培地です。
形質転換後の回復培養に主に用いられます。

  • Tryptone
    20
    g
  • Yeast extract
    5
    g
  • NaCl
    0.5
    g
  • KCl
    0.186
    g
  • Adjust pH with NaOH sol. to 7.0
  • H2O
    up to 1
    L
↓autoclave
  • 1M D-Glucose (filtered)
    20
    mL
  • 2M MgCl2 (autoclaved)
    5
    mL
  • 1.025
    L

GYT Medium

エレクトロポレーション用のコンピテントセル作成に用いられます。
→BDLではエレクトロポレーション用コンピテントセルを用意しております。

  • Tryptone
    0.25
    g
  • Yeast extract
    0.125
    g
  • Glycerol
    10
    mL
  • H2O
    up to 0.1
    L
0.22 μm filter

M9 minimal medium

大腸菌や微生物の培養に用いられる栄養素を最小限にした培地です。
培養対象に合わせてアミノ酸などの栄養素を添加して用います。

  • 5x M9 salts (autoclaved)
    200
    mL
  • 1M MgSO4 (autoclaved)
    2
    mL
  • 1M D-glucose (filtered)
    20
    mL
  • 1M CaCl2 (autoclaved)
    0.1
    mL
  • (Amino Acids and/or Vitamins
    )
  • H2O
    up to 1
    L

5x M9 salts

  • KH2PO4
    15
    g
  • Na2HPO4
    33.9
    g
  • NH4Cl
    5
    g
  • NaCl
    2.5
    g
  • H2O
    up to 1
    L
autoclave

YEP Broth

酵母エキスやペプトンを用いる酵母用培地です。

  • Peptone
    20
    g
  • Yeast extract
    10
    g
  •  
  • (Agar
    15
    g)
  • H2O
    up to 1
    L
autoclave

YPD Broth

YEPに炭素源としてグルコースを加えた培地です。

  • Peptone
    20
    g
  • Yeast extract
    10
    g
  • D-Glucose
    20
    g
  • (Agar
    15
    g)
  • H2O
    up to 1
    L
autoclave

NZM Broth

ラムダファージの維持増殖に用いられる培地です。

  • NZ-Anime
    10
    g
  • MgSO4・7H2O
    2
    g
  • NaCl
    5
    g
  • Adjust pH with NaOH sol. to 7.0
  • H2O
    up to 1
    L
autoclave

NZYM Broth (NZY)

NZMに酵母エキスを添加した培地です。

  • NZ-Anime
    10
    g
  • MgSO4・7H2O
    2
    g
  • NaCl
    5
    g
  • Yeast extract
    5
    g
  • Adjust pH with NaOH sol. to 7.0
  • H2O
    up to 1
    L
autoclave

NZCYM Broth

NZYMにカザミノ酸を添加した培地です。

  • NZ-Anime
    10
    g
  • MgSO4・7H2O
    2
    g
  • NaCl
    5
    g
  • Yeast extract
    5
    g
  • Casamino Acid
    1
    g
  • Adjust pH with NaOH sol. to 7.0
  • H2O
    up to 1
    L
autoclave

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