ゲノム編集効率確認キット
T7EI Genome Editing Detection Kit (50回) / T7 Endonuclease I (50回)
T7 Endonuclease I Genome Editing Detection Kitは、T7エンドヌクレアーゼIを用いた、ゲノムDNAの変異導入確認・プロトコルのゲノム編集効率を検出するキットです。 CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)、TALEN (Transcription activator-like effector nuclease)、ZFN (Zinc-finger nuclease)などによってゲノム編集された試料は、付属のバッファーによって溶解・保存が可能で、希釈を行うだけでPCRに用いることができます。PCR産物を再アニール後、T7エンドヌクレアーゼIによってミスマッチを切断・電気泳動を行い、切断量を比較することでゲノム編集効率確認が可能です。
製品の特長
- 細胞溶解~切断試験までを1セットに
- 細胞溶解は5分で完了、室温で長期保管可能
- ゲノム精製不要・希釈後直接PCR可能
- 切断試験はわずか15分
- コントロールのテンプレート・プライマーを同梱
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操作方法概略
ゲノム編集を行った細胞を回収し、細胞溶解保存液を用いて溶解した後、Dilution Bufferで希釈し、PCR反応を行います。AmpliconをT7エンドヌクレアーゼIで切断し、電気泳動で切断量を測定します。
キット内容
DS710:T7EI Genome Editing Detection Kit
- Lysis Buffer (細胞溶解保存液)
- 100× Dilution Buffer
- 2× PCR Mix
- 10× T7 Endonuclease I
- 10× Digestion Buffer
- PCR Control Template & Primers
DS715:T7 Endonuclease I
- 10× T7 Endonuclease I
- 10× Digestion Buffer
- Digestion Control
別途ご用意いただく試薬/器具/機器
- ゲノム編集部位を特異的に増幅可能なPrimerペア
- Nucleaseフリー水
- ヒートブロック
- マイクロピペット・ピペットチップ等の消耗品
- 核酸電気泳動システム・検出装置一式
使用例
参考文献
Chudi G. and Sanjay K., Nucleic Acids Research, 33, (19), 6225 (2005). [PMID:16264086]
L. Arvind et al., Nucleic Acids Research, 28, (18), 3417 (2000). [PMID:10982859]
Robert D. M. et al., Nature Genetics, 9, 177 (1995). [PMID:7719346]
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